蛋白酶K應(yīng)用范圍：

  蛋白酶K已廣泛應(yīng)用在皮革、毛皮、絲綢、醫(yī)藥、食品、釀造等方面。皮革工業(yè)的脫毛和軟化已大量利用蛋白酶，既節(jié)省時(shí)間，又改善勞動(dòng)衛(wèi)生條件。蛋白酶還可用于蠶絲脫膠、肉類嫩化、酒類澄清。臨床上可作藥用，如用胃蛋白酶治療消化不良，用酸性蛋白酶治療支氣管炎，用彈性蛋白酶治療脈管炎以及用胰蛋白酶、胰凝乳蛋白酶對(duì)外科化膿性創(chuàng)口的凈化及胸腔間漿膜粘連的治療。加酶洗衣粉是洗滌劑中的新產(chǎn)品，含堿性蛋白酶，能去除衣物上的血漬和蛋白污物，但使用時(shí)注意不要接觸皮膚，以免損傷皮膚表面的蛋白質(zhì)，引起皮疹、濕疹等過敏現(xiàn)象。具體應(yīng)用如下：

一、在肉類嫩化中的應(yīng)用

  蛋白酶K能分解肉的肌纖維，結(jié)締組織的蛋白質(zhì)，甚至包括彈性蛋白及膠原蛋白，使蛋白質(zhì)的各級(jí)空間結(jié)構(gòu)發(fā)生變化，部分肽鍵斷裂，肉料吸水膨脹，質(zhì)地變嫩。

二、在DNA、RNA提取過程中的應(yīng)用

  蛋白酶K在核酸的分離與純化過程中有著重要的應(yīng)用，能降解與核酸結(jié)合的蛋白質(zhì)，促進(jìn)核酸的分離。蛋白酶K還常被用于RNA提取過程中RNase的抑制和降解。

三、在原位雜交中的應(yīng)用

  蛋白酶K在原位雜交技術(shù)中通常用于雜交前標(biāo)本的處理，它具有消化包圍靶DNA蛋白質(zhì)的作用，以利于檢測(cè)探針的穿透，提高檢測(cè)的敏感性。

四、在滅活生活和工業(yè)用水中細(xì)菌的應(yīng)用

  病毒外層結(jié)構(gòu)一般以衣殼蛋白為主，衣殼蛋白保護(hù)病毒使其免受環(huán)境因素的影響并且決定病毒感染的特異性，蛋白酶K可以對(duì)病毒衣殼蛋白進(jìn)行破壞(識(shí)別位點(diǎn)是大腸桿菌B脂多糖外膜中的二糖基殘基)，從而干擾病毒與宿主細(xì)胞的結(jié)合。

五、在生物檢測(cè)中的應(yīng)用

  蛋白酶k由于能夠不特定的水解天然和變性蛋白，所以研究蛋白酶k對(duì)某一特定蛋白的作用對(duì)于研究這個(gè)蛋白起著非常關(guān)鍵的作用。

  性犯罪案件偵查工作經(jīng)常需要在夾雜大量其他細(xì)胞物質(zhì)的條件下查找精子進(jìn)行鑒定。

蛋白酶K的檢測(cè)報(bào)告：

1）不含RNase和DNase；

2）來源于基因重組酵母菌株；

3）在尿素和SDS中穩(wěn)定存在；

4）稀釋液：純水；

5）在較廣的pH范圍內(nèi)（pH 4-12.5）均有活性，最佳pH范圍為pH 7.5-8.0；

6）反應(yīng)條件：反應(yīng)緩沖液中37℃-56℃溫育1h；推薦反應(yīng)溫度選擇50- 55℃；

7）活力單位定義：在37℃，pH7.5的條件下，每分鐘釋放1µM酪氨酸所需要的蛋白酶K量定義為1個(gè)活性單位；

8）失活方法：反應(yīng)體系中加入PMSF或DFP抑制劑即可失活，65℃溫育10-15min可部分失活；

9）電泳純度：≥99%；

10）酶活性值（Enzyme activity）：≥30U/mg凍干粉。

蛋白酶K的保存方法：

保存在－20℃冰箱里，避免反復(fù)凍融，有效保證12月。

孵育溫度為55至65℃，理想孵育溫度為58℃，孵育時(shí)間為15分鐘至48小時(shí)；理想孵育時(shí)間為2小時(shí)。