TRIpure試劑是直接從細(xì)胞或組織中提取總RNA的試劑。它在破碎和溶解細(xì)胞時(shí)能保持RNA的完整性。加入氯仿后離心，樣品分成水樣層和有機(jī)層。RNA存在于水樣層中。收集上面的的水樣層后，RNA可以通過(guò)異丙醇沉淀來(lái)還原。在除去水樣層后，樣品中的DNA和蛋白也能相繼以沉淀的方式還原。乙醇沉淀能析出中間層的DNA，在有機(jī)層中加入異丙醇能沉淀出蛋白。共純化DNA對(duì)于樣品間標(biāo)準(zhǔn)化RNA的產(chǎn)量十分有用。無(wú)論是人、動(dòng)物、植物還是細(xì)菌組織，該方法對(duì)少量的組織(20-100mg)和細(xì)胞(5×106)以及大量的組織(≥1g)和細(xì)胞(>107均有較好的分離效果。TRIpure試劑操作上的簡(jiǎn)單性允許同時(shí)處理多個(gè)的樣品。所有的操作可以在一小時(shí)內(nèi)完成。TRIpure抽提的總RNA能夠避免DNA和蛋白的污染。故而能夠滿(mǎn)足RNA印跡分析、斑點(diǎn)雜交、poly(A)+選擇、體外翻譯、RNA酶保護(hù)分析和分子克隆等各類(lèi)生物分子學(xué)實(shí)驗(yàn)需求。

注意事項(xiàng)：
1. 當(dāng)TRIpure用量少于2ml時(shí)建議使用清潔的一次性的聚丙材質(zhì)試管。
2. 當(dāng)TRIpure用量較大時(shí)，可以使用玻璃試管(Corex)或聚丙材質(zhì)試管，事先檢驗(yàn)以確保該試管可以耐受加入TRIpure和氯仿后12,000×g的離心力。不可使用有裂縫或者破損的試管。
3. 離心前小心平衡試管。
4. 離心前玻璃管口必須蓋上鋁箔并用石蠟?zāi)し饪?，聚丙烯管必須蓋緊。
5. 從少量的組織(1~10mg)或細(xì)胞(102~104)中分離RNA樣品：往組織或細(xì)胞中加800µlTRIpure。待樣品裂解后，加入氯仿并進(jìn)行步驟2中的抽提操作。在用異丙醇沉淀RNA之前，加入5~10μg無(wú)RNA酶的glycogen作為水樣層的載體。為降低其黏度在加入氯仿前用26號(hào)注射器抽吸兩次以切斷基因組DNA。Glycogen會(huì)留在水樣層中并和RNA共析出。在濃縮到4mg/ml之前它不會(huì)抑制逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)第一鏈的合成也不會(huì)抑制PCR。
6. 在勻化后和加入氯仿之前，樣品可以在–60~–70°C保存至少一個(gè)月。RNA沉淀（步
驟4，RNA漂洗）溶于75%的乙醇在2~8°C至少可以保存一周，在–5~–20°C下至少可保存一年。
7. 臺(tái)式離心機(jī)最大能達(dá)到2,600×g的離心力，如果將離心時(shí)間延長(zhǎng)到30~60分鐘可
以滿(mǎn)足步驟2和步驟3中的操作。